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技术服务

TECHNICAL SERVICE

IRES活性检测

服务介绍

circRNA的翻译模式分为IRES介导和m6A甲基化修饰介导,针对这些潜在的翻译方式,安邦生物提供R系列载体构建和表达验证服务,验证circRNA的翻译是否由IRES介导。

IRES验证载体示意图

R1:Empty Vector(Luc2空载体)

Luc2报告载体是基于海肾荧光素酶(Renilla Luciferase, R-Luc)和萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase, F-Luc)的cap-independent translation报告载体,R-Luc由5’ m7G帽子结构介导翻译起始,F-Luc只在插入有IRES(Internal Ribosome Entry Site)活性的序列或能介导翻译起始的序列时可以翻译。Luc2空载体含有多克隆酶切位点,命名为Luc2-IRES- Report。

R2:EMCV IRES(插入EMCV IRES序列的Luc2报告载体阳性对照)

Luc2阳性对照载体含有EMCV IRES序列,命名为Luc2-EMCV-IRES-Report。

R3:IRES(插入预测IRES序列的Luc2报告载体)

使用Luc2-IRES-Report载体进行构建,插入预测的IRES序列全长。

R4:IRES-Del1(插入预测IRES前半部分序列的Luc2报告载体)

使用Luc2-IRES-Report载体进行构建,插入部分预测的IRES序列(已删除后半部分)。

R5:IRES-Del2 (插入预测IRES后半部分序列的Luc2报告载体)

使用Luc2-IRES-Report载体进行构建,插入部分预测的IRES序列(已删除前半部分)。

 

客户提供

circRNA名称(ID)、物种&已预测的IRES序列信息及序列删减要求信息。

 

我们提供

1. R系列翻译Luc2-IRES-Report载体质粒(可选:R1-R5);

2. 目的载体:10μg质粒+200μL甘油菌;

3. 对照载体:10μg质粒+200μL甘油菌;

4. Luc2-IRES-Report载体构建与验证实验报告:

① 载体构建步骤;

② 载体测序验证结果原始文件;

③ 细胞转染实验步骤;

④ 荧光素酶活性检测实验报告。