安邦帮选

• NovoNGS® ChiTag®酶具有打断双链DNA以及与抗体结合的活性。基于它的功能，我们将其应用于蛋白质-DNA互作研究的CUT&Tag。CUT&Tag是蛋白质-DNA互作关系研究的新方法，相较于传统的ChIP-Seq具有以下优点：省时高效，所需的细胞量少，背景信号低，可重复性好等，甚至可用于单细胞水平测序。CUT&Tag是研究体内蛋白与染色质DNA互相作用的有力工具，对基因调控、表观遗传等研究具有重大意义。
• 2.0版ChiTag®使用pAG-Tn5替换了原先的pA-Tn5，提高了效率，去除了抗体选择的限制性。

产品用途

蛋白质-DNA互作研究，可替代ChIP-Seq等方法；特别适用于小样本和单细胞的高效表观基因组分析。

保存条件

-20℃3个月，-80℃长期保存。

质量控制

经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，PCR方法检测无宿主DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

应用

• 1. 转座复合体构建（ChiTag®转座体）
• A. 冻干粉溶解
• 单链ME、单链adapter1、单链adapter2的冻干粉，高速离心1min，分别加入退火Annealing Buffer溶解，溶解浓度均为100μM。涡旋混匀，保证接头充分溶解。
• B. 制备两种接头
• ME和adapter1等体积混合、ME和adapter2等体积混合，PCR仪慢速降温退火，得到浓度均为50μmol的接头1和接头2。PCR设置为：95℃ 3min；95℃到25℃，45min；4℃Hold.
• C. 复合体制备
• 将接头1和接头2等体积混合，得到混合接头；酶与接头吹打混合均匀，室温孵育1h，即可。通常酶与接头混合的摩尔比例为1：1，亦可根据需要提高接头的孵育比例。
• 如果酶与接头摩尔比例1：1的话，如下配置：
• 双链接头混合物 (50pmol/μl),,1μl;;NovoNGS® ChiTag® 2.0 Transposase (6.5pmol/μl),,7.7μl
• 2. CUT&Tag实验测试
• 使用80,000个细胞进行Cut&Tag实验，使用的二抗为山羊抗，如下图所示，获得的文库产量比pA-Tn5的多，使用pAG-Tn5代替pA-Tn5，可降低实验对二抗的要求。

图例：Lane B：阴性对照（不加一抗）； Lane C：pA-Tn5 CUT&Tag扩增产物； Lane D：pAG-Tn5 CUT&Tag扩增产物； MK：DNA Maker。