NovoNGS® Tn5是一个活性十分优异的Tn5转座酶突变体，对于原核和真核生物DNA均具有高于野生型的转座插入效率。Tn5转座酶特异性识别转座子两端反向重复的ME序列(Mosaic End)，形成转座复合体后随机的将转座子插入靶DNA中。本产品也可用于构建二代测序文库片段化与加接头步骤中使用的转座体。
产品用途
- 1）构建二代测序文库片段化与加接头步骤中使用的转座体；
- 2）体外或体内构建转座子随机插入突变库；
- 3）大分子DNA(如BAC克隆)的快速测序；
- 4）靶DNA中引入抗性标记。
保存条件
单酶-70℃存放，解冻之后-20℃可存放2个月，包埋接头后-20℃保存，有效期1年。
质量控制
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，PCR方法检测无宿主DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
应用
- 构建二代测序文库：
- 1） 构建转座复合体
- A：冻干粉溶解
- 单链ME、单链adapter1、单链adapter2的冻干粉，高速离心1min，分别加入退火Annealing Buffer溶解，溶解浓度均为100μM/L。涡旋混匀，保证接头充分溶解。
- B：制备两种接头
- ME和adapter1等体积混合、ME和adapter2等体积混合，PCR仪慢速降温退火，得到浓度均为50μmol的接头1和接头2。
- PCR设置为：95℃ 3min；95℃到25℃，45min；4℃Hold.
- C：复合体制备
- 将接头1和接头2等体积混合，得到混合接头；酶与接头吹打混合均匀，室温孵育1h，即可。通常酶与接头混合的摩尔比例为1：1，亦可根据需要提高接头的孵育比例。
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