第一链cDNA合成预混液是以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本产品含有反转录反应所需的全部试剂(NovoScript® II Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs)。反应时只需要加入RNA模板和水即可,操作简单,降低操作过程中的污染。制品中含有去基因组成分gDNA Purge,以RNA为模板进行cDNA第一链合成时,可以同步去除基因组DNA污染,反应结束后,85℃加热5s,就可以失活反转录酶,RNA酶抑制剂。合成的第一链cDNA能直接用于PCR或荧光定量PCR的模板,第二链cDNA的合成或线性RNA扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。
产品特点
- 1)本制品采用耐高温逆转录酶,大幅提高热稳定性和cDNA合成效率;
- 2)本制品中添加的NovoScript® II Reverse Transcriptase无RNase H活性,可避免第一链cDNA合成过程中,RNA/DNA杂交模板链中RNA降解,保证cDNA合成的质量;
- 3)本制品中Random N6和Oligo(dT)18引物比例经过优化,可均匀合成样品中的cDNA;
- 4)本制品中含有去基因组成分,逆转录时可同步去除基因组DNA污染。
保存条件
-20℃。
注意事项
- 1)用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。
- 2)确保所用试剂中无RNA酶污染。
- 3)试剂盒要严格密封保存。在逆转录过程中,所有管子要确保扣严。
- 4)纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
- 5)为保证逆转录反应的有效进行,需使用高质量的RNA模板。
- 6)当模板含量较低或后续PCR扩增片段过长时可以适当延长逆转录时间。
- 7)2×NovoScript® Plus 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix、gDNA Purge及2×NovoScript® Plus No RT Control含有甘油,使用前请充分混匀后并短暂离心收集至管底再进行使用。
应用

图例)以Human RNA为模板,反转录成cDNA后进行梯度稀释,检测GAPDH基因。
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